Senna macranthera é uma árvore tropical nativa do Sudeste e Nordeste brasileiro. Em julho de 2006, sintomas de manchas cloróticas nas folhas jovens e de mosaico leve nas folhas mais velhas foram observados em plantas de S. macranthera em Viçosa, Estado de Minas Gerais, Brasil. A observação de preparações "leaf-dip" em microscópio eletrônico de transmissão revelou a presença de partículas alongado-flexuosas. O RNA viral foi extraído de vírions purificados e utilizado como molde para RT-PCR e clonagem de fragmentos do genoma viral. Dois fragmentos (0,9 kb e 2,0 kb de tamanho) foram clonados. A análise da sequência do fragmento de 0,9 kb indicou que este corresponde à região codificadora da proteína NIb de um potyvírus, com 72% de identidade de nucleotídeos com o Pepper mottle virus (PepMoV) e Peru tomato mosaic virus (PTV), enquanto a análise do fragmento de 2,0 kb indicou que este corresponde à ORF que codifica a possível replicase de um vírus classificado na recém-estabelecida ordem Tymovirales, com 74% de identidade de nucleotídeos com o Garlic virus A (GarV-A). Com base na análise molecular e na gama de hospedeiros, conclui-se que os fragmentos virais clonados representam novas espécies, para as quais sugerem-se os nomes Senna virus Y (gênero Potyvirus, família Potyviridae) e Senna virus X (ordem Tymovirales, gênero não definido).

Senna macranthera is a common tropical tree native to South- and Northeastern Brazil. In July 2006, symptoms of chlorotic spots in the young leaves and mild mosaic in the old leaves were observed in S. macranthera trees at Viçosa, State of Minas Gerais, Brazil. Electron microscopy examination of leaf dip preparations from the young leaves revealed the presence of flexuous rods. Viral RNA was extracted from purified virion preparations and used as a template for the RT-PCR-based cloning of viral genomic fragments. Two fragments (0.9 kb and 2.0 kb in length) were cloned. Sequence analysis of the 0.9 kb fragment indicated that it corresponded to the NIb coding region of a potyvirus, with nucleotide (nt) identity level of 72% for Pepper mottle virus (PepMoV) and Peru tomato mosaic virus (PTV), while analysis of the 2.0 kb fragment indicated that it corresponded to the putative replicase ORF, which displayed 74% nt identity with the ORF1 (replicase) of Garlic virus A (GarV-A). Based on molecular analysis and the isolates' host range, it is concluded that the viral fragments represent new viruses, for which we propose the names Senna virus Y (genus Potyvirus, family Potyviridae) and Senna virus X (unassigned genus, order Tymovirales).

Dezesseis plantas transgênicas (R0) de maracujá-amarelo (Passiflora spp.) foram obtidas expressando um RNA não-traduzível correspondente à região 3' do gene NIb e 5' do gene CP de um isolado brasileiro do CABMV. As plantas R0 foram propagadas vegetativamente por estaquia e inoculadas com os isolados CABMV-MG1 e CABMV-PE1. Uma das plantas (TE5-10) foi resistente ao isolado CABMV-MG1, porém suscetível ao isolado CABMV-PE1. As demais plantas transgênicas foram suscetíveis a ambos os isolados, apresentando sintomas sistêmicos semelhantes ao de plantas não-transformadas. A ausência de replicação viral nas plantas TE5-10 foi confirmada por ELISA indireto. A análise da transcrição do transgene nas plantas TE5-10 demonstrou que estas não acumulam o mRNA transgênico, mesmo antes da inoculação com o vírus. Após a inoculação, o RNA viral foi detectado apenas em plantas inoculadas com o isolado CABMV-PE1. Esses resultados confirmam que a planta TE5-10 é resistente ao isolado CABMV-MG1, e sugerem que o mecanismo da resistência é baseado em silenciamento gênico pós-transcricional, o qual já se encontra ativado nas plantas antes da inoculação com o vírus.

Sixteen transgenic yellow passionfruit (Passiflora spp.) plants (R0) were obtained which express a non-translatable transgenic RNA corresponding to the 3' region of the NIb gene and the 5' region of the CP gene, derived from the genome of a Brazilian isolate of Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV). The transgenic plants were propagated by stem cuttings and challenged by sap inoculation with isolates CABMV-MG1 and CABMV-PE1. One transgenic plant (TE5-10) was resistant to the isolate CABMV-MG1, but susceptible to CABMV-PE1. The remaining transgenic plants developed systemic symptoms, equal to non-transformed plants, when inoculated with either isolate. The absence of virus in TE5-10 plants was confirmed by indirect ELISA. Transcription analysis of the transgene demonstrated that the TE5-10 plant did not accumulate transgenic mRNA, even before inoculation. After inoculation, viral RNA was only detected in plants inoculated with CABMV-PE1. These results confirm that the transgenic plant TE5-10 is resistant to isolate CABMV-MG1, and suggest that the resistance mechanism is post-transcriptional gene silencing, which is already activated in the transgenic plants before virus inoculation.

Vinte isolados virais provenientes de Capsicum spp. foram coletados em Minas Gerais, São Paulo, Espírito Santo e Rio de Janeiro visando definir a etiologia dos mosaicos. Para a caracterização biológica realizou-se teste de gama de hospedeiros e inoculação em cultivares diferenciadoras de pimentão (Capsicum annuum). Dois isolados provenientes de batata (Solanum tuberosum) (PVY N-BR e PVY O-BR) foram utilizados como controles. Os resultados indicaram considerável grau de variabilidade biológica entre os isolados, embora todos tenham sido identificados preliminarmente como Potato virus Y (PVY). A reação das cultivares diferenciadoras classificou os isolados como patótipo 1 ou 1.2 de PVY. Anti-soros foram produzidos a partir de partículas virais purificadas de um isolado fraco e um forte. O uso desses anti-soros em ELISA indireto levou a resultados positivos contra os isolados testados. Os anti-soros reagiram também contra PVY N-BR e PVY O-BR, embora este último tenha apresentado reação mais fraca. Para caracterização molecular, seqüenciaram-se os genes da polimerase (NIb) e da proteína capsidial (cp), e da região 3' não-traduzida (3'NTR) de isolados biologicamente distintos. A análise filogenética confirmou a identidade de seis isolados como Pepper yellow mosaic virus (PepYMV), um potyvírus descrito recentemente infetando pimentão no Brasil. Esse resultado sugere que o PepYMV pode ser a espécie de potyvírus predominante em Capsicum spp. no Brasil. O fato de isolados de PepYMV apresentarem gama de hospedeiros semelhante à do PVY, e de os dois vírus apresentarem relacionamento sorológico, ressalta a utilidade da análise molecular para a classificação de potyvírus provenientes de Capsicum spp.

Twenty isolates were obtained from Capsicum spp. plants in the states of Minas Gerais, São Paulo, Espírito Santo and Rio de Janeiro. The isolates were biologically characterized using a host range assay and inoculation into a series of differential sweetpepper (Capsicum annuum) cultivars. Two isolates from potato (Solanum tuberosum) (PVY N-BR e PVY O-BR) were used as controls. The isolates displayed a high degree of biological variability, although they were all preliminarly identified as Potato virus Y (PVY). The reaction in the differential cultivars enabled the classification of the isolates as pathotypes 1 or 1.2 of PVY. The production of antiserum was carried out using purified virions of one mild and one severe isolate. Using these antisera in indirect ELISA, positive reactions against all the isolates were observed. The antisera also reacted against PVY N-BR and PVY O-BR, although the latter reacted weakly. For molecular characterization, the polymerase (NIb) and capsid protein (cp) genes and the 3' non-translated region (3'NTR) of biologically distinct isolates were cloned and sequenced. Phylogenetic analysis confirmed the identity of six isolates as Pepper yellow mosaic virus (PepYMV), a potyvirus recently described infecting sweet pepper (Capsicum annuum) in Brazil. This result suggests that PepYMV could be the predominant potyvirus causing mosaic in Capsicum species in Brazil. Since PepYMV isolates have host ranges similar to PVY (including the reaction in differential cultivars), and the two viruses cross-react serologically, the usefulness of the molecular analysis is demonstrated in the identification of potyviruses from Capsicum spp.

Um anti-soro policlonal específico para Watermelon mosaic virus (WMV) foi produzido por meio da imunização de coelhos com proteína capsidial purificada, expressa in vitro em células de Escherichia coli. O gene cp foi amplificado via RT-PCR utilizando oligonucleotídeos específicos, a partir de RNA viral extraído de preparações virais concentradas. O fragmento amplificado foi clonado em pBLUESCRIPT KS+ e completamente seqüenciado para confirmação de sua identidade e integridade. Em seguida, o fragmento foi subclonado no vetor de expressão pRSET-A. Plasmídeos recombinantes foram utilizados para a expressão da proteína capsidial em E. coli BL21::DE3. A proteína foi purificada por meio de cromatografia de afinidade em coluna de Ni+-NTA, a partir de proteínas totais extraídas de E. coli. Uma vez purificada, a proteína foi quantificada e utilizada para imunização dos coelhos. O anti-soro foi testado quanto a sua especificidade e sensibilidade em testes de Western blot, DAS-ELISA, imunodifusão e ELISA indireto. Todos os testes demonstraram que o anti-soro produzido a partir da expressão in vitro da proteína capsidial é altamente específico para a detecção do WMV em extratos foliares, não tendo sido observada nenhuma reação heteróloga interespecífica.

A Watermelon mosaic virus (WMV)-specific, polyclonal antiserum was raised in rabbits by immunization with purified capsid protein expressed and purified from Escherichia coli cells. The cp gene was RT-PCR-amplified using specific oligonucleotides, and viral RNA extracted from concentrated particles as a template. The amplified fragment was cloned in pBLUESCRIPT KS+ and fully sequenced in order to confirm its identity and integrity. The fragment was subsequently subcloned into the pRSET-A expression vector. Recombinant plasmids were used to induce the expression of the capsid protein in E. coli BL21::DE3. The protein was purified by affinity chromatography using a Ni+-NTA resin, from E. coli total protein extract. The purified protein was quantified and used for the immunization of rabbits. The antiserum was tested for its sensitivity and specificity in Western blot, DAS-ELISA, immunodiffusion and indirect ELISA assays. All tests indicated that the antiserum raised from in vitro-expressed capsid protein is highly specific for the detection of WMV in plant extracts, with no interspecific, heterologous reactions being observed.

A análise da variabilidade genética de geminivírus infetando tomateiros (Lycopersicon esculentum) na região Sudeste do Brasil foi realizada por meio do seqüenciamento direto de fragmentos de PCR amplificados com oligonucleotídeos universais para o componente A de begomovírus, seguido de análise filogenética. Amostras de tomateiro e de algumas plantas daninhas associadas, apresentando sintomas típicos de infecção por vírus, foram coletadas em sete municípios nos estados de Minas Gerais, Espírito Santo e Rio de Janeiro. Após extração de DNA total e PCR, verificou-se que 137 amostras estavam infetadas por begomovírus, de um total de 369 amostras coletadas. A análise filogenética indicou existir uma grande diversidade genética de begomovírus em tomateiros nas três regiões amostradas, com a predominância de uma espécie viral (Tomato chlorotic mottle virus, TCMV) na Zona Metalúrgica de MG, enquanto no RJ e ES predomina uma outra espécie não completamente caracterizada. A análise filogenética indicou ainda a presença de outras quatro possíveis novas espécies de begomovírus em tomateiro. O alto grau de diversidade genética encontrado sugere uma transferência recente de begomovirus a partir de hospedeiros silvestres para o tomateiro. O relacionamento filogenético encontrado entre os begomovirus de tomateiro e isolados virais obtidos a partir de plantas daninhas favorece essa hipótese.

The genetic diversity of begomovirus isolates from tomato (Lycopersicon esculentum) fields in the Southeastern region of Brazil was analyzed by direct sequencing of PCR fragments amplified by using universal oligonucleotides for the begomovirus DNA-A, and subsequent computer-aided phylogenetic analysis. Samples of tomato plants and associated weeds showing typical symptoms of virus infection were collected at seven locations in the states of Minas Gerais, Espírito Santo and Rio de Janeiro. A total of 137 out of 369 samples were infected with a begomovirus based on PCR analysis. Phylogenetic analysis indicated a high degree of genetic diversity among begomoviruses infecting tomatoes in the sampled area. One species (Tomato chlorotic mottle virus, TCMV) occurs predominantly in Minas Gerais, whereas in Rio de Janeiro and Espírito Santo a distinct species, not yet fully characterized, predominates. Phylogenetic analysis further indicates the presence of an additional four possible new species. This high degree of genetic diversity suggests a recent transfer of indigenous begomovirus from wild hosts into tomatoes. The close phylogenetic relationship verified between begomovirus infecting tomato and associated weeds favors this hypothesis.